PCR

详细说明


在前PCR区建立PCR混合物。

⑴可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃,在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。

⑵如果你的实验室使用多套引物,以致于配制包括所有剂的单一反应混合物不够经济,可以考虑分装保存够一天的PCR成分。

⑶作为一个规则,应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来分析样品配制和PCR前过程的效率和洁净程度。而且,你也希望通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物。

⑷阴性样品要与每组样品同时做,以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产物的污染,阴性对照应该包括核酸以外的所有试。

⑸当做阳性对照时,有两个理由决定了应该使用最少数量的核酸。

⑹由于必须有对照反应,对照模板的特点应该予以考虑。

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